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来源

岛津分析中心

本文参考版中国药典《雄黄-药材与饮片质量标准草案》公示稿和《汞、砷元素形态及价态测定法》征求意见稿，建立了高效液相色谱电感耦合等离子体质谱法（HPLC-ICP-MS）测定雄黄中三价砷和五价砷的方法。样品经过处理后，采用高效液相色谱LC-20Ai对不同形态砷进行分离，电感耦合等离子体质谱ICPMS-进行定量分析。实验结果表明：该方法线性范围在5~μg/L范围内回归系数大于0.，加标回收率在90%-%之间，该方法适用于雄黄样品中三价砷和五价砷含量的测定。

雄黄俗称二硫化二砷，为橘黄色粒状固体或橙黄色粉末，在临床上应用广泛，可以治疗慢性支气管炎及支气管哮喘、热带性嗜伊红细胞增多症、带状疱疹等等。同时雄黄也具有毒性，雄黄加热时被氧气氧化成剧毒的三氧化二砷，久服易发生砷中毒。

砷是致癌物质，长期低剂量接触会引起皮肤癌、膀胱癌和肺癌，同时引发神经系统和心血管系统疾病。砷的生物毒性不仅与其含量有关，更大程度上还与其存在形态有关。在常见砷的化合物中，三价砷（AsⅢ）和五价砷（AsⅤ）毒性较大，一甲基砷（MMA）和二甲基砷（DMA）毒性较小，砷甜菜碱（AsB）、砷胆碱（AsC）和砷糖等基本没有毒性。

由于砷的毒性、致癌性、迁移性质和生物效应均取决于它的化学形态，并且各砷形态随着所处环境的不同处于动态互变之中，所以测定总砷含量无法准确表示出砷的暴露水平。因此，对砷的各种存在形态分别进行分析测定十分必要。

本文参考版中国药典《雄黄-药材与饮片质量标准草案》公示稿和《汞、砷元素形态及价态测定法》征求意见稿，采用岛津高效液相色谱LC-20Ai与电感耦合等离子体质谱仪ICPMS-联用对雄黄中三价砷和五价砷进行分析。

实验部分

1.1对照品

五价砷、三价砷、一甲基砷、二甲基砷、砷胆碱和砷甜菜碱购于国家标准物质中心。

1.2实验检材

市售雄黄

1.3仪器

本实验使用岛津高效液相色谱仪LC-20Ai与电感耦合等离子体质谱仪ICPMS-联用系统。具体配置为LC-20Ai×2输液泵，DGU-20A3在线脱气机，SIL-20AC自动进样器，CTO-20AC柱温箱，CBM-20A系统控制器，ICPMS-电感耦合等离子体质谱仪，LabSolutionsICPMSTRM工作站；APW电子天平（岛津）;USK-4R超声清洗器（W,40kHz）。

1.4试剂

磷酸二氢铵、磷酸二氢钾、乙二胺四醋酸二钠均为分析纯，氢氧化钠、氨水均为优级纯。胰酶（来源于猪胰腺）。

方法与结果

2.1标准品溶液配制

精密吸取对照品储备溶液适量，以0.02mol/LEDTA溶液为稀释液配制每1mL含两种价态砷各5ng、20ng、50ng、ng、ng、ng、ng（均以砷计）系列浓度的混合标准溶液，摇匀。

准确称取雄黄样品30mg，置于mL塑料容量瓶中，加人工肠液约mL，摇匀，置37℃水浴中超声处理（功率W，频率40kHz）2小时（每隔15分钟充分摇匀一次），放冷，用人工肠液稀释至刻度，摇匀，静置24小时，吸取中层溶液约15mL（吸取时应避免带入颗粒），用微孔滤膜（0.45μm）滤过，精密量取续滤液5mL，置50mL塑料容量瓶中，加0.02mol/L乙二胺四醋酸二钠溶液稀释至刻度，摇匀，即得。同法制备空白溶液和加标回收溶液。

色谱条件参见表1、表2。

仪器分析条件见表3。

结果与讨论

3.1专属性考察

对空白和六种形态砷溶液进样考察，排除系统干扰，并且考察六种形态砷的分离度，以确保实际样品分析过程中不会造成假阳性检出，见图1。

3.2线性关系考察

按“2.1标准溶液配制”项下规定进行标准曲线系列浓度的配制，记录各成分的峰面积，以浓度（浓度均以As计）与峰面积做线性回归绘制标准曲线，结果如下所示。

3.3检测限及分离度考察

将市售雄黄按“2.2样品前处理”进行处理后进HPLC-ICP-MS分析，并对其进行加标回收试验，测定结果见表6。

测定结果显示，三价砷和五价砷总量（以As计）为0.22%，远低于限值要求的7%，该雄黄样品符合中国药典的安全要求，该方法适用于雄黄样品中三价砷和五价砷含量的测定。

结论